蛋白印迹膜再生液/膜再生液/抗体剥离液体/一抗二抗去除液

描述：

膜再生液，也称做抗体剥离液体、一抗二抗去除液。允许对同一张膜进行多次Western Blot检测。在室温条件下，将用过的膜浸泡在膜再生液中30分钟，能够选择性清除与膜抗原结合的第一抗体及第二抗体，但不影响电转移到膜上的蛋白。随后可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验，可利用同一张膜进行多次蛋白检测。不仅适宜用少量样品多次检测多种不同蛋白，即使样品量并不匮乏，采用这种多次检测同一张膜上的蛋白的策略，能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。

特点：

（1）无毒无味无害，室温保存和使用；

（2）可对同一张膜进行10次以上的Western Blot检测。

适用：

硝酸纤维素膜或PVDF膜。使用前膜可以保存在PBS或TBS缓冲液，也可以室温干燥保存数月。

干的PVDF膜应该先用甲醇泡5分钟。

安全性：

无毒无味。按照普通化学品安全规范进行操作和处置。

储存：

室温保存，一年有效。温度过低可能出现浑浊。

效果展示：

第一次Western Blot                  第一次Western Blot后用膜再生液处理，然后进行第二次Western Blot

操作步骤：

1. 将膜充分浸泡于适当体积的再生液中，室温孵育15~30分钟并不时晃动。孵育时间的长短应参考后面的说明进行优化。洗脱某些抗体需要较长的时间如30~60分钟。

2. 用镊子取出膜，用自备Western Blot洗涤缓冲液或普利莱封闭洗涤缓冲液（B1009）淋洗膜一次，再洗膜5分钟。

3. 此时膜上抗体已去除，膜已再生。用脱脂奶粉或BSA封闭，进行下一轮Western Blot实验。

说明:

1. 膜再生或Stripping的实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下，将与抗原分子结合的一抗和二抗洗脱下来。有许多因素影响抗体从膜上的洗脱，如膜的类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性等。按下面的说明优化再生液中孵育膜的时间至关重要。

2. 确定膜上抗体是否去除与优化再生液中孵育膜的时间：用ECL工作液孵育再生后的膜约1分钟，然后进行X光胶片曝光并显影，可确定膜上的抗体是否完全去除。如显示条带，表明抗体未完全去除，应继续将膜浸泡在再生液中孵育30~60分钟。然后再次ECL 检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体完全去除并确定最佳孵育时间。

3. 由于至今尚不清楚的原因，使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用BSA封闭的膜上的抗体更容易被Strip下来。因此准备进行Strip的膜，应该使用脱脂奶粉而不是BSA封闭。

4. 尽量避免使用干燥保存的膜，因为干的膜上的抗体很难被Strip干净。